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目录 4-8
中文摘要 8-10
Abstract 10-12
缩略词表 13-14
第一章 前言 14-31
1.1 课题的提出 14-15
1.2 文献综述 15-26
1.2.1 模式植物成花调控研究 15-16
1.2.2 光周期途径(photoperiod pathway) 16-17
1.2.3 赤霉素途径(GA pathway) 17-18
1.2.4 春化途径(vernalization pathway) 18-20
1.2.5 自主途径(autonomous pathway) 20-22
1.2.6 年龄途径(ageing pathway) 22-23
1.2.7 常温途径(ambient temperature pathway) 23-24
1.2.8 开花调控途径的整合 24-25
1.2.9 开花基因表达调控方式 25-26
1.3 多年生植物成花调控研究 26-28
1.4 柑橘成花调控研究进展 28-30
1.4.1 柑橘成花习性 28-29
1.4.2 柑橘成花调控机理进展 29-30
1.5 本研究的目的、内容与意义 30-31
第二章 普通枳和早实枳成花转变期基因差异表达分析 31-53
2.1 前言 31
2.2 材料和方法 31-35
2.2.1 材料 31
2.2.2 总RNA提取 31-32
2.2.3 mRNA分离 32-33
2.2.4 第一链cDNA合成 33
2.2.5 实时定量PCR检测 33-34
2.2.6 大规模平行测序技术(MPSS) 34
2.2.7 MPSS数据分析 34-35
2.2.8 差异表达基因的功能分类 35
2.2.9 基因差异表达的验证 35
2.3 结果与分析 35-49
2.3.1 转录组测序结果组装 35-37
2.3.2 早实枳和普通枳中MPSS标签序列的差异表达 37
2.3.3 Unigenes的长度分布及注释 37-38
2.3.4 差异表达基因的功能分类 38-40
2.3.5 筛选成花调控基因 40-46
2.3.6 验证差异表达基因 46-49
2.4 讨论 49-53
2.4.1 转录组测序为成花转变研究提供大量信息 49
2.4.2 枳成花转变涉及所有的成花调控途径 49-51
2.4.3 成花转变阶段表达差异基因参与成花调控 51-53
第三章 枳PtFCA的分离、表达分析及功能鉴定 53-87
3.1 前言 53
3.2 材料和方法 53-62
3.2.1 材料 53-54
3.2.2 总RNA提取 54
3.2.3 mRNA分离 54
3.2.4 第一链cDNA合成 54-55
3.2.5 实时定量PCR检测 55
3.2.6 3’RACE 55-56
3.2.7 载体及菌株 56
3.2.8 超表达载体构建 56-57
3.2.9 细胞定位载体构建 57
3.2.10 分子荧光互补(BiFC)载体构建 57
3.2.11 酵母双杂交(Y2H)载体构建 57
3.2.12 载体转化农杆菌 57
3.2.13 阳性菌落检测及保存 57-58
3.2.14 花序侵染法转化拟南芥 58
3.2.15 阳性苗鉴定 58-59
3.2.16 转基因拟南芥的表型统计 59
3.2.17 基因枪介导的洋葱表皮亚细胞定位 59-60
3.2.18 基因枪介导的烟草By2悬浮细胞系双分子荧光互补 60
3.2.19 酵母双杂交 60-62
3.2.20 基因的结构和序列分析 62
3.3 结果与分析 62-82
3.3.1 PtFCA基因的'分离及序列分析 62-64
3.3.2 PtFCA选择性剪切验证 64-65
3.3.3 PtFCA聚类分析 65-68
3.3.4 PtFCA亚细胞定位 68-69
3.3.5 PtFCA在普通枳和早实枳不同发育阶段的表达模式 69-71
3.3.6 PtFCA在普通枳和早实枳空间表达模式 71-72
3.3.7 PtFCA在fca-1拟南芥中的功能验证 72-74
3.3.8 PtFCA互作蛋白筛选 74-78
3.3.9 FCA-FY互作在植物中具有保守性 78-79
3.3.10 PtFCA基因对温度和ABA的响应 79-82
3.4 讨论 82-87
3.4.1 FCA的基因结构和序列在植物中的保守性及多样性 82-83
3.4.2 PtFCA可能参与调控枳成花时间和根系发育 83-84
3.4.3 PtFCA通过WW结构域与发育相关的蛋白互作 84-85
3.4.4 PtFCA表达受到ABA和环境温度影响 85-87
第四章 全文小结与展望 87-89
参考文献 89-106
附录 106-119
附录Ⅰ：部分操作步骤及培养基配方 106-109
附录Ⅱ：附图及附表 109-117
附录Ⅲ：作者简介 117-119
致谢 119